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      1. NRPB76 IMAC琼脂糖凝胶FF

        发布日期:2020-05-09 阅读次数:826

        品  名:IMAC琼脂糖凝胶FF

        英文名:Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow, IMAC NUPharose FF

        目录号:NRPB76L .NRPB76S(预装柱)

        规  格:20 ml100 ml1L1 ml预装柱5 ml预装柱特殊规格订制

        运  输:2 ~ 30℃常压 .避光

        贮  存:20%乙醇2 ~ 25℃

        保质期:5.


        相关介绍: 

          螯合金属离子亲和层析(IMAC)琼脂糖凝胶FF具有螯合金属离子的能力如螯合Cu2+ .Zn2+ .Co2+ .Ni2+ .Fe3+等螯合金属离子后可用于富含组氨酸 .色氨酸 .半胱氨酸的蛋白质纯化其中最常见的是用于融合了6-8个组氨酸标签的蛋白质纯化.与IDA琼脂糖凝胶FF相比IMAC琼脂糖凝胶FF1般可以更牢固的结合金属离子于纯化标签蛋白方面有可能获得更高纯度的样品.


        技术指标:

        基质

        6%高度交联的琼脂糖凝胶

        配基密度

        ≥40 μmol/ml

        螯合载量

        ≥15μmol Cu2+/ml

        填料粒径

        60~180 μm

        好的流速

        800 cm/h

        推荐流速

        50-100 cm/h

        pH稳定性

        pH 2~14

        0.3 MPa

        载量

        ≥40 mg His-tag重组蛋白/ml(螯合Ni2+)


        使用方法:

        1 .色谱柱装填

        (1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度1样液体好的做脱气处理.

        (2)于柱子下端加入蒸馏水以除去柱子中的空气关闭柱子出口于柱内保留少量的蒸馏水.

        (3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流以减少气泡的产生让填料先自然沉降建议柱床高度不超过20cm.

        (4)柱压不超过0.3MPa如果装柱系统中无法测柱压则正常使用流速填装.

        (5)填装好的IMAC琼脂糖凝胶FF柱用5个柱体积蒸馏水清洗使用的流速建议为100cm/h.

        2 螯合金属离子

        (1)根据需要选择金属盐1般配置0.1-0.2M金属盐溶液常见的有CuSO4 .ZnSO4 .NiSO4 .CoCl2等.注意金属盐溶液的pH以偏酸性为宜(如pH4-6Fe3+1般需要pH3)防止于螯合时pH上升产生沉淀.

        (2)蒸馏水清洗后的IMAC琼脂糖凝胶FF用1-3个柱体积金属盐溶液过柱螯合金属离子然后用5个柱体积以上的蒸馏水清洗层析柱去除游离的金属盐溶液.

        (3)用5个柱体积以上的乙酸缓冲液(20mM 乙酸-乙酸钠1M 氯化钠pH4.0)清洗去除结合不牢固的金属离子减少于使用过程的脱落.

        (4)处理完后可用结合缓冲液平衡层析柱用于目标蛋白的纯化.

        3 .纯化目标蛋白

        (1)选择缓冲液:1般选用pH6-8的结合缓冲液常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液 .20-200mM Tris-HCl缓冲液等.于缓冲液中1般要加入0.15-0.5M的NaCl以消除离子交换作用.于初次使用IMAC琼脂糖凝胶FF推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO40.5M NaClNaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液.

        (2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液1致.为保证缓冲液1致可以于结合缓冲液中破碎细菌 .或调解pH与结合缓冲液1致 .或交换至结合缓冲液(常用方法有透析 .超滤 .脱盐柱换液等) .或用结合缓冲液稀释2-10倍等.样品上柱前应0.45μm过滤.

        (3)平衡上样:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF用结合缓冲液平衡5个柱体积然后将样品上柱上完样后用结合缓冲液平衡.

        (4)洗脱优化:螯合金属离子的IMAC琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱.初次实验不知道洗脱的咪唑浓度可尝试不同的浓度洗脱建议于结合缓冲液中分别加入5mM .10mM .20mM .50mM .100mM .200mM .500mM咪唑(咪唑为碱性物质加入咪唑后需重新调节pH)浓度从低到高先后分别洗脱和收集通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份.

        4 .再生清洗

        (1)多次使用后或需要更换螯合的金属离子必须将凝胶脱去金属离子再生.脱金属离子方法:用5-10个柱体积蒸馏水淋洗柱子再用10个以上柱体积的100 mM EDTA淋洗柱子再用3-5个柱体积的0.5M NaCl洗掉残留的EDTA.

        (2)多次使用的柱子脱镍后1般需要清洗.清洗方法:用0.1-1.0M NaOH反向清洗柱子流速50cm/h保持1-2h能去除结合强的杂质同时也能去除热源.NaOH清洗后应立即用5个柱体积以上的蒸馏水清洗至中性清洗后可按照螯合金属离子的方法重新螯合金属离子.

        5 .保存

        IMAC琼脂糖凝胶FF和螯合金属离子后的IMAC琼脂糖凝胶FF都可以用20%乙醇保存1般蒸馏水清洗后用3个柱体积20%乙醇清洗.20%乙醇清洗后的层析柱和凝胶可放置于2-25℃条件下保存.

        中文名

        英文简称

        货号

        规格

        产品描述

        重力预装柱

        IMAC琼脂糖凝胶FF
             重力预装柱

        Immobilized Metal ion
             Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

        NRPB76S-Z11

        1*1mL

        1支*1ml

        NRPB76S-Z41

        4*1mL

        4支*1ml

        NRPB76S-Z15

        1*5mL

        1支*5mL

        NRPB76S-Z25

        2*5mL

        2支*5mL

        AKTA中压预装柱

        IMAC琼脂糖凝胶FF
             中压预装柱

        Immobilized Metal ion
             Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow pre-packed column

        NRPB76S-Y11

        1*1mL

        1支*1ml

        NRPB76S-Y41

        4*1mL

        4支*1ml

        NRPB76S-Y15

        1*5mL

        1支*5mL

        NRPB76S-Y25

        2*5mL

        2支*5mL

        填料

        IMAC琼脂糖凝胶FF

        Immobilized Metal ion Affinity Chromatography NUPharose Fast Flow

        NRPB76L-10

        10mL

        1瓶*10ml

        NRPB76L-20

        20mL

        1瓶*20ml

        NRPB76L-100

        100mL

        1瓶*100ml

        NRPB76L-500

        500ml

        1瓶*500ml

        注:欧洲杯竞猜生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积


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