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      1. NRPB57S Ni-NTA琼脂糖凝胶FF预装柱

        发布日期:2020-10-27 阅读次数:1552

        品  名:Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

        英文名:Nickel Nitrilotriacetic acid NUPharose Fast Flow, Ni-NTA NUPharose FF

        目录号:NRPB57L .NRPB57S(预装柱)

        规  格:20 ml100 ml1L1 ml预装柱5 ml预装柱特殊规格订制

        运  输:2 ~ 30℃常压 .避光

        贮  存:20%乙醇2 ~ 25℃

        保质期:5.


        相关介绍: 

        Ni-NTA琼脂糖凝胶FF以琼脂糖微球为基质通过活化偶联次氮基3乙酸(NTA)再螯合Ni2+.与亚氨基2乙酸(IDA)相比具有更好的螯合剂 .还原剂 .碱性的耐受性如样品中含有1-10mM EDTA或1-10mM β-巯基乙醇或5mM DTT可正常纯化;于螯合镍的情况下也可以用0.1M NaOH清洗.


        Ni-NTA琼脂糖凝胶FF主要用于纯化带组氨酸标签(His-Tag)的重组蛋白.纯化原理是利用重组蛋白组氨酸标签的咪唑环可与过渡金属Ni2+形成稳定的配位键因4芴匾 .牢固 .可逆地吸附于固定这些金属离子的基质结合了His-Tag重组蛋白的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF1般通过增加咪唑浓度进行竞争洗脱.


        技术指标:

        基质

        4%琼脂糖凝胶

        配基

        -N(CH2COOH)3

        配基密度

        15 μmol/ml

        填料粒径

        60~180 μm

        好的流速

        800 cm/h

        推荐流速

        50-100 cm/h

        pH稳定性

        pH 5-12pH 3~13

        0.3 MPa

        载量

        20 mg His-tag重组蛋白/ml 


        使用方法:

        1 .色谱柱装填

        (1)所有需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度1样液体好的做脱气处理.

        (2)于柱子下端加入蒸馏水以除去柱子中的空气关闭柱子出口于柱内保留少量的蒸馏水.

        (3)将琼脂糖凝胶连续倒入柱子时要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流以减少气泡的产生让填料先自然沉降.

        (4)柱压不超过0.3MPa如果装柱系统中无法测柱压则正常流速下填装.

        (5)填装好的Ni-NTA琼脂糖凝胶FF柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液平衡建议流速100cm/h平衡后的柱子可以用于His-Tag重组蛋白的上样和洗脱纯化.

        2 .上样

        (1)缓冲液选择:1般选用pH6-8的结合缓冲液常用缓冲液有10-00mM 磷酸钠缓冲液 .20-200mM Tris-HCl缓冲液等.于缓冲液中1般要加入0.15-0.5M的NaCl以消除离子交换作用.于初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF推荐使用50mM PBS(50 mM NaH2PO40.5M NaClNaOH调节pH 7.4)作为结合缓冲液.

        (2)样品处理:样品的缓冲液应与所选结合缓冲液1致.为保证缓冲液1致可以于结合缓冲液中破碎细菌 .或调解pH与结合缓冲液1致 .或交换至结合缓冲液(常用方法有透析 .超滤 .脱盐柱换液等) .或用结合缓冲液稀释2-10倍等.样品上柱前应0.45μm过滤.

        3 .洗脱

        (1)Ni-NTA琼脂糖凝胶FF最常用的洗脱方法为增加咪唑浓度进行洗脱.

        (2)咪唑为碱性相应缓冲液配制后需要用HCl进行调节pH.

        (3)于初次使用Ni-NTA琼脂糖凝胶FF不知道洗脱的咪唑浓度建议于结合缓冲液中分别加入10mM .20mM .50mM .100mM .200mM .500mM咪唑浓度从低到高分别洗脱和收集通过SDS-PAGE电泳等方法鉴定洗脱组份.

        (4)有条件的也可以进行线性咪唑梯度洗脱确定较佳洗脱条件.

        4 .于位清洗

        于多次使用后需要于位清洗常用方法为先5个柱体积蒸馏水清洗再用1-3个柱体积50mM NaOH清洗10-20min立即用5个柱体积结合缓冲液(50mM PBS)清洗平衡.

        导购指南

        中文名

        英文简称

        货号

        规格

        产品描述

        重力预装柱

        Ni-NTA琼脂糖凝胶FF重力预装柱

        Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

        NRPB57S-Z11

        1*1mL

        1支*1ml

        NRPB57S-Z41

        4*1mL

        4支*1ml

        NRPB57S-Z15

        1*5mL

        1*5mL

        NRPB57S-Z25

        2*5mL

        2支*5mL

        AKTA中压预装柱

        Ni-NTA琼脂糖凝胶FF中压预装柱

        Ni-NTA NUPharose FF pre-packed column

        NRPB57S-Y11

        1*1mL

        1支*1ml

        NRPB57S-Y41

        4*1mL

        4支*1ml

        NRPB57S-Y15

        1*5mL

        1*5mL

        NRPB57S-Y25

        2*5mL

        2支*5mL

        填料

        Ni-NTA琼脂糖凝胶FF

        Ni-NTA NUPharose FF

        NRPB57L-10

        10mL

        1瓶*10ml

        NRPB57L-20

        20mL

        1瓶*20ml

        NRPB57L-100

        100mL

        1瓶*100ml

        NRPB57L-500

        500ml

        1瓶*500ml

        注:欧洲杯竞猜生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积


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