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    1. NRPB06L 重耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

      发布日期:2020-10-27 阅读次数:1834

      品  名:耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

      英文名:Alkali-tolerant Protein A NUPharose Fast Flow , rat-PA NUPharose FF

      目录号:NRPB06L .NRPB06S(预装柱)

      规  格:20 ml100 ml1 L1 ml预装柱5 ml预装柱特殊规格订制

      运  输:2 ~ 25℃常压 .避光

      贮  存:20%乙醇2 ~ 8℃

      保质期:3.


      相关介绍: 

      耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF与普通的蛋白A琼脂糖凝胶相比主要提高4胶的耐碱性可以用0.1 ~ 0.5 M NaOH溶液清洗和去除热源.于骨架与重组耐碱蛋白A键合上分别设计了延伸碳臂和定向结合位点保证了重组耐碱蛋白A与骨架的定向牢固键合以及与抗体的高效亲和.


      技术指标:

      基质

      4%高度交联琼脂糖凝胶

      配基

      重组耐碱蛋白A

      配基密度

      ≥6 mg/ml

      填料粒径

      60 ~ 180 μm

      好的流速

      800 cm/h

      推荐流速

      20 ~ 100 cm/h

      工作(清洗)pH

      3 ~ 11(2 ~ 13)

      耐反压

      0.3 MPa

      载量

      ≥40 mg/ml IgG


      产品特点:

      1)配基脱落:约1~7 ng rat-PA/mg IgG配套的rat-PA试剂盒(NRPB53S)检测多次使用的洗脱液中残留rat-PA含量

      2)耐碱性

      于25℃的条件下将rat-PA浸于不同浓度的NaOH溶液中:

      0.1 M 处理72 h载量维持于90%以上;

      0.5 M处理16 h于80%以上处理36 h于50%以上;

      1.0 M处理4 h于90%以上处理8 h于50%以上.

      图片39.jpg


      3)耐酸性

      于25℃的条件下将rat-PA浸于不同pH的酸溶液中:

      pH 3.0 .pH 2.0 .0.1 M HCl (pH 1.0) 处理6天载量均维持于90%以上

      0.5 M HCl处理2天载量于80%以上处理6天于50%以上 


      图片40.jpg


      4)耐压性

      仪器:AKTA explorer 100

      柱子:1.0 cm×30 cm

      流速:每30 s增加0.5 ml/min

      图片41.jpg

      5)使用寿命

      200次循环纯化牛血清中IgG每次使用0.1 M NaOH处理15 min200次使用后未发现明显的载量损失.

      图片1.png


      应用举例:

      结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液150 mM NaClpH 7.4

      洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸缓冲液pH 4.0

      中和缓冲液:1 M Tris-HClpH 9.0

      1)1 ml耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;

      2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;

      3)将5 ml兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml0.45 μm4す滤上样;

      4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;

      5)用洗脱缓冲液洗脱抗体收集洗脱峰并用中和缓冲液调节其pH至中性;

      6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M NaOH溶液再生清洗;

      7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度于95%以上.

      图片2.png


      图 1


      注意事项:

      1)预填柱使用简易方便于没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务.

      2)样品洗脱后1般pH很低应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris-HClpH 9.0) 将收集到的抗体溶液中和到中性或于收集容器中事先装5% ~ 20% .pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液)以利于维持抗体的生物活性避免抗体失活.

      3)使用时保证柱子和缓冲液的温度1致避免柱床内产生气泡如果已经产生气泡可以自行重装柱子.

      4)使用后应进行于位清洗1般建议用0.1 M NaOH清洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min)立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上.

      5)更高要求(消毒 .去内毒素 .超牢固蛋白残留等)的于位清洗可以先用含还原剂(如100 mM DTT .β-ME或1-巯基甘油)的平衡缓冲液清洗3 ~ 5个柱体积再用0.1 ~ 0.5 M NaOH洗1 ~ 5个柱体积(10 ~ 30 min)然后用无菌无内毒素的平衡缓冲液清洗5个柱体积以上.

      6)虽然本产品具有较好的碱耐受性但长期使用较高的NaOH浓度(如0.5 mol/L)清洗仍会缩短使用寿命建议每1 ~ 3次用0.1 M NaOH清洗1次每5 ~ 20次用0.5 M NaOH清洗1次.

      7)为了更好的保护填料应避免强烈的pH变化建议酸性洗脱目的抗体后用平衡缓冲液恢复至中性再进行NaOH清洗.

      8)本产品具有极低的配基脱落率(<10 ng/mg IgG)结合耐碱特性特别适用于单克耛固宓纳产.但实验发现长期储存后首次使用配基脱落率会比较高建议长期储存后的首次使用先用酸性洗脱液清洗3 ~ 5个柱体积再用平衡缓冲液平衡和样品纯化.

      推荐流速

      预装柱体积 1 ml 5 ml 10 ml

      流速(ml /min ) 0.2 1 2

      9)


      推荐流速

      预装柱体积

      1 ml

      5 ml

      10 ml

      流速(ml /min )

      0.2

      1

      2

      导购指南

      中文名

      英文简称

      货号

      规格

      产品描述

      重力预装柱

      重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF重力预装柱

      rat-PA  NUPharose FF pre-packed column

      NRPB06S-Z11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB06S-Z41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB06S-Z15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB06S-Z25

      2*5mL

      2支*5mL

      AKTA中压预装柱

      重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF中压预装柱

      rat-PA  NUPharose FF pre-packed column

      NRPB06S-Y11

      1*1mL

      1支*1ml

      NRPB06S-Y41

      4*1mL

      4支*1ml

      NRPB06S-Y15

      1*5mL

      1*5mL

      NRPB06S-Y25

      2*5mL

      2支*5mL

      填料

      重组耐碱蛋白A琼脂糖凝胶FF

      rat-PA  NUPharose FF

      NRPB06L-10

      10mL

      1瓶*10ml

      NRPB06L-20

      20mL

      1瓶*20ml

      NRPB06L-100

      100mL

      1瓶*100ml

      NRPB06L-500

      500ml

      1瓶*500ml

      注:欧洲杯竞猜生物填料体积为实际琼脂糖凝胶体积



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